Antagonistic activity of lactic acid bacteria isolated from Minas artisanal cheeses against Brucella abortus / Atividade antagonista de bactérias lácticas isoladas de queijos Minas artesanais contra Brucella abortus

This study aimed to evaluate methods for studying the in vitro antimicrobial activity of lactic acid bacteria (LAB) against Brucella abortus and to evaluate the antagonistic effect of LAB on the viability of this pathogen. A total of 18 LAB strains (Lactobacillus plantarum, n = 11; Pediococcus acidilactici, n = 1; Lactobacillus rhamnosus, n = 4; and Lactobacillus brevis,n = 2), isolated from Minas artisanal cheeses produced in three regions (Canastra, Campos das Vertentes, and Araxá) of Minas Gerais State, Brazil, were tested for their antimicrobial activity against B. abortus using three methods: spot-on-lawn, agar well diffusion assay, and antagonistic activity of the culture supernatants. None of the tested LAB strains could inhibit B. abortus in the spot-on-lawn and agar-well diffusion assays. The supernatants produced by LAB had an acidic pH, with intensity depending on bacterial growth and strain, and could inhibit the growth of B. abortus. In contrast, pH-neutralized (pH 7.0) LAB supernatants did not suppress the growth of B. abortus. The results showed that the best technique to study the in vitro antagonism of LAB against B. abortus was the antagonistic activity of culture supernatants. The growth of B. abortus may have been inhibited by acid production.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar métodos de estudo in vitro da atividade antimicrobiana de bactérias lácticas contra Brucella abortus e avaliar o efeito antagônico das mesmas sobre a viabilidade deste patógeno. Um total de 18 amostras de bactérias lácteas (Lactobacillus plantarum, n = 11; Pediococcus acidilactici, n = 1; Lactobacillus rhamnosus, n = 4; e Lactobacillus brevis, n = 2), isoladas de exemplares de Queijo Minas Artesanal produzidos em três regiões (Canastra, Campos das Vertentes e Araxá) do estado de Minas Gerais, Brasil, foram testados quanto à sua atividade antimicrobiana contra B. abortus usando três métodos: spot-on-lawn, ensaio de difusão em poço e atividade antagonista de sobrenadante de cultura. Nenhuma das cepas testadas foi capaz de inibir B. abortus nos ensaios spot-on-lawm e de difusão em poço. Os sobrenadantes produzidos pelas bactérias lácteas apresentaram pH ácido, com intensidade dependente do crescimento bacteriano e da amostra, podendo inibir o crescimento de B. abortus. Em contraste, os sobrenadantes com pH neutralizado (pH 7,0) não inibiram o crescimento de B. abortus. Os resultados mostraram que a melhor técnica para estudar o antagonismo in vitro de bactérias lácteas contra B. abortus foi a atividade antagonista de sobrenadante de cultura. O crescimento de B. abortus pode ter sido inibido pela produção de ácido.(AU)

Microbial diversity, morpho-textural characterization, and volatilome profile of the Portuguese thistle-curdled cheese Queijo da Beira Baixa PDO.

The aim of the present study was to characterize the bacterial and fungal communities naturally occurring in Queijo da Beira Baixa PDO cheese samples produced in Castelo Branco district (Beira Baixa Region, Portugal) through viable counts and metataxonomic analyses. Physico-chemical and morpho-textural analyses were also carried out, together with the analysis of volatile organic compounds (VOCs). In the analyzed samples, pH values ranged between 4.72 ± 0.15 and 5.85 ± 0.02, with values of lactic acid content comprised between 0.64 ± 0.00 and 1.95 ± 0.16 g 100 g-1. Specific volume of cheese ranged from 1.09 ± 0.08 to 1.32 ± 0.02 g mL-1. Texture profile analysis showed hardness ranging between 38.3 ± 9.6 N and 68.55 ± 7.5 N. As for lactic acid bacteria, presumptive lactococci, thermophilic cocci, and lactobacilli counts up to 9 Log cfu g-1. Coagulase-negative cocci showed counts up to 7 Log cfu g-1. Enterococci counts were up to 6 Log cfu g-1. Finally, counts of eumycetes showed values up to 4 Log cfu g-1. The results of metataxonomic analysis of bacteria showed the dominance of Lactococcus lactis in all the samples. Moreover, other taxa were detected, including Lactiplantibacillus plantarum, Loigolactobacillus coryniformis, Lactococcus piscium, Streptococcus thermophilus, and Lacticaseibacillus zeae. Mycobiota was characterized by the presence of Candida sake, Ustilago, Cladosporium variabile, Starmerella, Debaryomyces hansenii, and Pichia kluyveri. In the analyzed Queijo da Beira Baixa PDO cheese samples, carboxylic acids represented the most detected VOCs, followed by esters, carbonyl compounds, and alcohols.

Interações populacionais mediadas por quorum sensing na microbiota do soro-fermento utilizado na produção do queijo Canastra / Population interactions mediated by quorum sensing in the microbiota of the endogenous culture used in the production of canasta cheese

Bactérias regulam a expressão de diversos fenótipos de acordo com a sua densidade populacional, em um comportamento conhecido como quorum sensing. Em micro-organismos de origem alimentar, o quorum sensing pode influenciar na formação de biofilmes, produção de toxinas e de enzimas hidrolíticas. Em bactérias Gram-negativas a sinalização é normalmente mediada por moléculas de N-acilhomoserina lactona (AHLs), conhecidas por autoindutor 1 (AI-1). Estudos revelam a inibição do quorum sensing nestas bactérias por enzimas que degradam as AHLS, em um processo denominado quorum quenching. Tipicamente brasileiro, o queijo Canastra é um produto artesanal maturado, produzido a partir de leite cru e do pingo, um tipo de soro-fermento coletado e utilizado diariamente na produção. A composição microbiana do pingo é diversificada e característica da região produtora. Essa combinação de bactérias, única em cada queijaria, resulta em aroma e textura típicos. Enquanto a microbiota Gram-positiva contribui para o desenvolvimento de sabor, textura e aroma no produto, bactérias Gram-negativas nesses queijos são geralmente associadas à formação de olhaduras, aromas desagradáveis, má coagulação da massa e até à patogenicidade. Este trabalho visou analisar a interação entre a microbiota Gram-positiva e Gram-negativa presente no pingo pela detecção dos sistemas de quorum sensing e quorum quenching nas amostras. A presença de AHLs foi avaliada em 45 amostras de pingo, a partir da extração em acetato de etila acidificado e da avaliação dos extratos por meio de bioensaios com Agrobacterium tumefaciens WCF47(pCF218)(pCF372) e KYC55(pJZ410)(pJZ372)(pJZ384), resultando em apenas uma amostra positiva. Em seguida, 350 isolados foram obtidos a partir de 11 amostras de pingo, sendo 200 isolados classificados como Gram-positivos e 150 Gram-negativos. Os Gramnegativos foram avaliados quanto à produção de AHLs in vitro através de ensaio em placa utilizando as estirpes biossensoras A. tumefaciens WCF47(pCF218)(pCF372), Chromobacterium violaceum CV026 e Escherichia coli pSB403, resultando em 39 isolados produtores de AHLs, provenientes de 10 pingos diferentes. Já os isolados Gram-positivos foram analisados quanto à capacidade de inibição do QS utilizando as estirpes biossensoras C. violaceum CV026 e A. tumefaciens WCF47(pCF218)(pCF372), em meio suplementado com C6-HSL ou 3-oxo-C12-HSL. Foi detectada a inibição total da resposta ao quórum por 78 isolados testados, enquanto a inibição parcial foi provocada por outros 63. A inibição do crescimento das estirpes biossensoras também foi observada para 24 isolados. Os isolados promotores de inibição parcial foram recultivados em meio mínimo com C6-HSL ou 3-oxo-C12-HSL como únicas fontes de carbono. Foram recuperados 28 isolados, e a ação desses sobre diferentes substratos foi avaliada, resultando em 22 isolados produtores de lactonases e 6 produtores de acilase. Os 39 isolados Gram-negativos e os 28 isolados Gram-positivos finais foram identificados por MALDI-TOF MS, resultando, segundo o conhecimento do autor, no primeiro relato de produção de AHLs por Pseudomonas fulva, Enterobacter xiangfangensis e Lelliottia amnigena, bem como a produção de lactonases por Staphylococcus xylosus e a produção de acilase por S. aureus, Microbacterium maritypicum e Rothia kristinae. Este trabalho mostrou que interações populacionais mediadas por quorum sensing dependente de AHLs na microbiota do soro-fermento são possíveis. Porém, essas interações estão propensas a serem inibidas por meio de lactonases e acilases produzidas por parte das bactérias Gram-positivas

Bacteria regulate the expression of different phenotypes according to their population density, in a behavior known as quorum sensing. In food-borne microorganisms, quorum sensing can influence the formation of biofilms, production of toxins and hydrolytic enzymes. In Gram-negative bacteria, signaling is normally mediated by Nacyl homoserine lactone molecules (AHLs), known as autoinducer 1 (AI-1). Studies reveal the inhibition of quorum sensing in these bacteria by enzymes that degrade AHLS, in a process called quorum quenching. Typically Brazilian, Canastra cheese is a matured artisanal product, produced from raw milk and pingo, a type of endogenous culture collected and used daily in production. The microbial composition of pingo is diverse and characteristic of the producing region. This combination of bacteria, unique in each cheese factory, results in a typical aroma and texture. While the Gram-positive microbiota contributes to the development of flavor, texture and aroma in the product, Gram-negative bacteria in these cheeses are generally associated with the formation of eyes, off-flavors, poor curd coagulation and even pathogenicity. Thus, this work aimed to analyze the interaction between the Gram-positive and Gram-negative microbiota present in this culture by detecting quorum sensing and quorum quenching systems in the samples. The presence of AHLs was evaluated in 45 samples of pingo, with extraction with acidified ethyl acetate and the evaluation of the extracts through bioassays with Agrobacterium tumefaciens WCF47(pCF218)(pCF372) and KYC55(pJZ410)(pJZ372)(pJZ384 ), resulting in only one positive sample. Then, 350 isolates were obtained from 11 endogenous culture samples, with 200 being classified as Gram-positive and 150 Gram-negative. Gram-negatives were evaluated for the production of AHLs in vitro by plaque assay using the biosensor strains A. tumefaciens WCF47(pCF218)(pCF372), Chromobacterium violaceum CV026 and Escherichia coli pSB403, resulting in 39 AHL-producing isolates from 10 different samples. Gram-positive isolates were analyzed for their ability to inhibit quorum sensing using biosensor strains C. violaceum CV026 and A. tumefaciens WCF47(pCF218)(pCF372), in medium supplemented with N-hexanoyl-L-homoserine lactone or 3-oxo-dodecanoyl-Lhomoserine lactone. Total inhibition of the quorum response was detected by 78 tested isolates, while partial inhibition was caused by 63. Growth inhibition of biosensor strains was also observed for 24 isolates. Partial inhibition promoter isolates were recultured on minimal medium with C6-HSL or 3-oxo-C12-HSL as sole carbon sources. Twenty-eight isolates were recovered, and the action of these isolates on different substrates was evaluated, resulting in 22 lactonase producers and 6 acylase producers. The 39 Gram-negative isolates and the final 28 Grampositive isolates were identified by MALDI-TOF MS, resulting, to the best of the author's knowledge, in the first report of AHL production by Pseudomonas fulva, Enterobacter xiangfangensis and Lelliottia amnigena, as well as the lactonase production by Staphylococcus xylosus and acylase production by S. aureus, Microbacterium maritypicum and Rothia kristinae. This work demonstrated that population interactions mediated by AHLs-dependent quorum sensing in Canastra cheese endogenous culture microbiota are possible. However, these interactions are prone to inhibition by lactonases and acylases produced by Gram-positive bacteria

Caracterização molecular de Staphylococcus aureus isolados de queijos artesanais da Serra da Canastra / Molecular characterization of Staphylococcus aureus isolated from artisanal cheeses from Serra da Canastra

O queijo Minas Artesanal da Canastra é produzido na Serra da Canastra (MG), utilizando leite cru, coalho e pingo, que é uma cultura endógena natural de cada queijaria. Devido ao uso de leite cru, o produto pode veicular microrganismos causadores de doenças veiculadas por alimentos, como Staphylococcus aureus. A caracterização molecular é uma ferramenta importante para avaliar a população microbiana do alimento e direcionar a aplicação de medidas de controle na produção. Este estudo caracterizou a diversidade genética, o potencial de virulência e determinou o perfil de susceptibilidade a antimicrobianos de S. aureus isolados de queijos produzidos na Serra da Canastra. Para o estudo transversal foram analisados 248 isolados de queijos que tinham um tempo de maturação de 22 dias, provenientes de 83 propriedades. Por outro lado, no estudo longitudinal foram analisados outros 197 isolados coletados ao longo do processo de maturação, provenientes de três propriedades. Os isolados foram submetidos a testes bioquímicos para confirmação do gênero e para a confirmação da espécie de S. aureus, foi identificado o gene nuc por meio da técnica de PCR. Além disso, foi pesquisado o gene mecA para a detecção de S. aureus Resistente a Meticilina (MRSA). Após os testes de confirmação, 144 isolados do estudo transversal e 159 do estudo longitudinal foram positivos para o gene nuc, específico para S. aureus. Posteriormente, o perfil clonal foi determinado por Eletroforese de Campo Pulsado (PFGE) utilizando a enzima SmaI e tipagem do locus agr por PCR multiplex. A análise por PFGE foi realizada no programa BioNumerics. A técnica PCR foi realizada para identificar a presença de genes que codificam a produção de hemolisinas, toxina TSST-1, enterotoxinas SEs (SEA, SEB, SEC, SED, SEE, SEG, SEH, SEI, SEJ, SEO, SEM), formação de biofilme e Componentes Microbianos de Superfície que Reconhecem a Matriz de Moléculas Adesivas (MSCRAMMs). Os isolados foram submetidos ao teste de susceptibilidade a antimicrobianos por disco de difusão. Por último, a formação de biofilme em microplaca de 96 poços, em caldo TSB a 37°C, foi verificada pela metodologia de Cristal Violeta. O gene mecA foi detectado em 1,9% dos 445 isolados. A tipagem agrrevelou que 83 (27,4%) dos isolados são do tipo agr-I, 95 (31,4%) agr-II e 43 (14,2%) agr-III, sendo que não foram detectados isolados classificados como agr-IV. A tipagem por PFGE revelou um total de 54 perfis. Assim, um isolado representativo de cada perfil foi utilizado nos demais testes que mostraram a presença dos genótipos spa mais frequentes t127 e t605 (20,58%); t002 (14,70%), seguidos pelos tipos t267 (8,82%); t1234 e t693 (5,8%) e t021, t177, t306, t321, t359, t442, t521, t693 e t5493 (2,9%). Além disso, encontramos a presença dos genes do grupo SEs, sea 1 (1,8%), seh 11 (20,3%), sei 10 (18,5%), sej 7 (12,9%), seg e seo 14 (25,9%), sem 8 (14,8%), e os genes seb, sec, sed, see e tst não foram detectados. Para os genes das hemolisinas, hla foi positivo em todos os isolados e hlb foi positivo em 53 (98,1%) isolados. Os genes positivos para MSCRAMMS foram fnbA, fnbB 18 (33,3%), clfA, clfB e eno 53 (98,1%), fib 44 (81,4%), bbp 4 (7,4%), cna 17 (31,4%) e ebps 10 (18,5%). Por último, os genes de formação de biofilme icaA e icaD estiveram presentes em 38 (70,3%) e 25 (46,2%) dos isolados, respectivamente. Na avaliação de susceptibilidade a antibióticos dos 54 isolados escolhidos, 25 (46,3%) apresentaram maior resistência a penicilina e 13 (24,0%) a tetraciclina. Em menor porcentagem (1,8%), 1 isolado cada foi resistente a eritromicina, cefoxitina, clindamicina, gentamicina, cotrimazol, azitromicina e trimetropim. Além disso, 8 isolados (14,8%) apresentaram resistência intermediaria a tetraciclina, 3 (5,5%) a gentamicina e 1 (1,8%) a tobramicina. No teste para a determinação da formação de biofilme por cristal violeta, 13,7%, foram classificados em isolados não formadores, 60,8% em fracamente formadores, 25,5% moderadamente formadores e nenhum como fortemente formador. A alta diversidade de cepas de S. aureus observada neste estudo mostrou que existem vários tipos de linhagens circulando na região da Canastra. A caracterização revelou uma elevada frequência de genes de virulência e que mais estudos são necessários para avaliar o potencial de produção de enterotoxinas nos queijos artesanais. A melhora dos procedimentos de higienização durante todas as etapas de produção pode ser uma solução para a redução dos níveis de contaminação por S. aureus

Canastra Minas Artesanal cheese is produced in Serra da Canastra (MG), using raw milk, rennet and a natural endogenous culture called pingo. Due to the use of raw milk, the product can carry microorganisms that cause foodborne diseases, such as Staphylococcus aureus. Molecular characterization is an important tool to assess the microbial population of food and guide the application of control measures in production. This study characterized the genetic diversity, virulence potential and determined the antimicrobial susceptibility profile of S. aureus isolated from cheeses produced in Serra da Canastra. A total of 248 isolates from 22 days ripened cheeses were obtained from 83 properties (cross sectional study). Another 197 isolates were collected during maturation (longitudinal study), in three properties. The isolates were submitted to biochemical tests to confirm the genus and to confirm the S. aureus species, the nuc gene was identified by PCR. In addition, the detection of mecA gene was performed for the detection of Methicillin Resistant S. aureus (MRSA). After confirmation tests, 144 isolates from the cross-sectional study and 159 from the longitudinal study were positive for the nuc gene, specific for S. aureus. Subsequently, the clonal profile of the isolates was determined by Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) using the SmaI enzyme and typing of the agr locus by multiplex PCR. PFGE analysis was performed using the BioNumerics program. PCR was performed to identify the presence of genes encoding the production of hemolysins, TSST-1 toxin, enterotoxins SEs (SEA, SEB, SEC, SED, SEE, SEG, SEH, SEI, SEJ, SEO, SEM), biofilm formation and microbial surface components recognizing adhesive matrix molecules (MSCRAMMs). The isolates were submitted to the antimicrobial susceptibility test by disc diffusion. Finally, biofilm formation in a 96-well microplate in TSB broth at 37°C was verified by the Cristal Violeta method. The mecA gene was detected in 1.9% of the 445 isolates. Agr typing revealed that 83 (27.4%) of the isolates are agr-I, 95 (31.4%) agr-II and 43 (14.2%) agr-III, and no isolate was classified as agr-IV. PFGE typing revealed a total of 54 profiles. Thus, a representative isolate of each profile was used in the other tests that showed the presence of the most frequent spagenotypes t127, t605 (20.58%); t002 (14.70%), followed by types t267 (8.82%); t1234, t693 (5.8%) e t021, t177, t306, t321, t359, t442, t521, t693 and t5493 (2.9%). In addition, we found the presence of the genes of the SEs group: sea 1 (1.8%), seh 11 (20.3%), sei 10 (18.5%), sej 7 (12.9%), seg and seo 14 (25.9%), sem 8 (14.8%), while seb, sec, sed, see and tst genes were not detected. For hemolysin genes, hla was positive in all isolates and hlb was positive in 53 (98.1%) isolates. The positive genes for MSCRAMMS were: fnbA, fnbB 18 (33.3%), clfA, clfB e eno 53 (98.1%), fib 44 (81.4%), bbp 4 (7.4%), cna 17 (31.4%) and ebps 10 (18.5%). Finally, the biofilm formation genes icaA and icaD were present in 38 (70.3%) and 25 (46.2%) of the isolates, respectively. In the evaluation of antibiotic susceptibility of the 54 isolates, 25 (46.3%) showed greater resistance to penicillin and 13 (24.0%) to tetracycline. In a lower percentage (1.8%), 1 isolate each was resistant to erythromycin, cefoxitin, clindamycin, gentamicin, contrimazole, azithromycin and trimethoprim. In addition, 8 isolates (14.8%) showed intermediate resistance to tetracycline, 3 (5.5%) to gentamicin and 1 (1.8%) to tobramycin. In the test for the determination of biofilm formation by crystal violet, 13.7% were classified as non-forming isolates, 60.8% as weakly forming, 25.5% moderately forming and none as strongly forming. The high diversity of S. aureus strains observed in this study showed that there are several types of strains circulating in the Canastra region. The characterization revealed a high frequency of virulence genes and that further studies are needed to assess the potential for enterotoxin production in artisanal cheeses. The improvement of hygiene procedures during all stages of production can be a solution for reducing the levels of contamination by S. aureus

Caracterização da microbiota de queijos artesanais provenientes da Serra da Canastra - MG e da cultura iniciadora natural utilizada em sua produção / Microbiota characterization of artisanal cheeses from Serra da Canastra - MG and their endogenous starter culture

O queijo Canastra possui grande importância na cultura e economia local, é parte do Patrimônio Imaterial do Brasil (IPHAN, 2014) e recebeu o selo de produto com designação de origem em 2012 (INPI, 2016). Sua produção utiliza leite, sal, coalho e uma cultura iniciadora natural, chamada popularmente de pingo. Esse estudo visou a caracterização da microbiota presente no queijo maturado da Serra da Canastra e no pingo utilizado em sua produção utilizando técnicas avançadas de sequenciamento em larga escala para identificação das bactérias e fungos ali presentes. Nossos dados da microbiota bacteriana foram comparados com dados da microbiota de outros queijos brasileiros e do mundo disponíveis na literatura. As principais bactérias encontradas em amostras de pingo pertencem aos gêneros Lactococcus (45.6%), Streptococcus (30.3%), Staphylococcus (5.1%), e em amostras de queijo aos gêneros Lactococcus (22.5%), Streptococcus (27.2%), Corynebacterium (18.8%), Staphylococcus (13.6%), Leuconostoc (6.3%) e Weissella (6%). Os principais gêneros de fungos encontrados nos queijos foram Debaryomycesa (78.6%), Trichosporona (7.8%). Nosso estudo foi capaz de separar a microbiota dos queijos produzidos na Serra da Canastra de outros queijos na Europa e América do Norte, sendo o pH um possível fator de segregação. Também foi observada uma diferença entre a microbiota do queijo Canastra com outros queijos Brasileiros. Além disso, visualizamos que a distância geográfica entre produtores e a sazonalidade possuem um efeito sobre a microbiota dos pingos e queijos. A partir da análise de todos os microrganismos encontrados na microbiota bacteriana, foram detectados táxons que discriminam produtores por suas aplicações de boas práticas de fabricação e por sua infraestrutura. Observamos proporções menores de um táxon de Kocuria Kristinae nos pingos e um de Streptococcus nos queijos e proporções maiores de um táxon de Staphylococcus nos queijos. Também pudemos observar uma diminuição nas proporções de táxons de Debaryomycesa e aumento na proporção de táxons de Trichosporona na composição fúngica dos queijos, possivelmente devido a transição sazonal do período seco para o chuvoso. Usando técnicas moleculares de sequenciamento em larga escala, demonstramos que há uma diferença na microbiota presente em diferentes áreas da Serra da Canastra, um possível efeito da sazonalidade na composição fúngica e bacteriana. E evidenciamos que táxons de Streptococcus, Staphylococcus e Kocuria estão correlacionados às boas práticas de produção e elucidamos a conexão existente entre a microbiota do pingo e a do queijo. Estes resultados podem influenciar o desenvolvimento de métodos de rastreamento de sub-regiões específicas da Canastra e auxiliar os produtores na produção de queijos de boa qualidade, mantendo as características específicas de sua região

The Canastra cheese has great importance for the local culture and economy, being part of the Intangible Heritage of Brazil (IPHAN, 2014). It has received the protected designation of origin certification in 2012 (INPI, 2016). It's made using milk, salt, rennet and a endogenous starter culture, popularly called as "pingo". This study aimed to characterize the microbiota present in the Serra da Canastra's cheese and the pingo used in its production. In order to conduct this research we used next generation sequencing to identify the bacteria and fungi present there. Our bacterial microbiota dataset was compared with microbiota datasets from other Brazilian and world cheeses available in the literature. The main bacteria found were Lactococcus (45.6%), Streptococcus (30.3%) and Staphylococcus (5.1%) in the endogenous starter samples and Lactococcus (22.5%), Streptococcus (27.2%), Corynebacterium (18.8 %), Staphylococcus (13.6%), Leuconostoc (6.3%) and Weissella (6%) in cheese samples. The main fungi found in the cheeses were Debaryomycesa (78.6%) and Trichosporona (7.8%). We were able to separate the microbiota from Serra da Canastra cheeses and other cheeses in Europe and North America, being the pH a possible segregation factor. Furthermore, a difference was also observed between the microbiota of Canastra and other Brazilian cheeses. In addition, we observed that the geographical distance between producers and the seasonality could be affecting the pingos and cheeses microbiota. We found bacterial taxa that could discriminate producers by their good manufacturing practices and their local infrastructure. Low levels of good manufacturing practices (GMPs) were assigned to bigger proportions of a Kocuria Kristinae taxon in the pingos and a Staphylococcus taxon in the cheeses. Also, higher levels of GMPs were assigned to smaller proportions of Streptococcus taxons in the cheeses. Furthermore We could observe a decrease of Debaryomycesa and an increase of Trichosporona proportions in the fungal composition of cheeses. This could be due to a climate transition: from the dry season to the rainy season. Using large-scale sampling coupled with molecular sequencing techniques, we observe a connection between pingo and cheeses microbiota. We show that the microbiota of different areas in Serra da Canastra is different, also, there is a possible effect of seasonality on fungal and bacterial composition. Furthermore, we could see that Streptococcus, Staphylococcus and Kocuria taxons are correlated with good practices. These results may influence the development of tracking methods for specific Canastra subregions and assist producers to manufacture good quality cheeses while maintaining the specific characteristics of their region

Impact of environmental conditions on the ripening of Queijo de Évora PDO cheese.

"Queijo de Évora" is a traditional Portuguese cheese from raw ewe's milk and granted with PDO label. It is ripened traditionally in rooms with empirical control of temperature and humidity. Nowadays, almost all cheese factories use rooms with temperature and humidity control, but still a significant heterogeneity among cheeses is acknowledged due to unequal distribution of environmental conditions. This paper discusses the influence of the environmental conditions on the ripening of Queijo de Évora, including the application of computational fluid dynamics in steady state conditions. Experimental data was obtained in cheeses ripened along the traditional ripening cycle, in different locations. A significant influence of environmental conditions was observed, especially air velocity and humidity, affecting physical-chemical, microbiological and sensory characteristics. Locations with higher air velocity, presented cheeses with lower moisture content, higher mesophilic bacteria count, darker appearance and higher number of holes. Locations with higher humidity presented cheeses with lower scores on some sensorial parameters like appearance, firmness and intensity of odor. The results of computational fluid dynamics made possible the identification of areas in and around the cheese stacks were the air distribution is less than adequate or uneven, which may influence the evolution of cheese during ripening.

Evaluation of gas holes in "Queijo de Nisa" PDO cheese using computer vision.

"Queijo de Nisa" is a traditional Portuguese cheese, granted with PDO label, produced with raw ewe's milk in which the aqueous extract of cardoon flower Cynara cardunculus L. is the only coagulant allowed. As in similar cheeses with no use of starter cultures or pasteurisation, the quality and food safety are depending on prevention, high hygienic standards and a proper manufacturing process. This study investigated the use of computer vision as novel method for the evaluation of gas holes in Queijo de Nisa in three different ripening dates (0, 15 and 35 days). A total of 48 samples were produced using cardoon flower from three different origins (C1, C2 and C3) and a commercial vegetable coagulant (C4). The results presented a high correlation between image-dependent attributes and physical-chemical properties during ripening time, especially within the first 15 days of ripening time, where major structural changes were observed inside the Queijo de Nisa cheese. Principal component analysis presented a strong correlation (p < 0.05) between image parameters and the physical-chemical evolution until 15 days. From 15 to 35 days, the evolution of cheeses was mainly depending on structural parameters, like G'1 Hz and hardness. No influence was observed due to the geographical origin of cardoon flower.

Assessment of the microbiological quality of pattern minas cheese commercialized in Uberlândia and Patos de Minas, Minas Gerais / Avaliação microbiológica de queijo minas padrão comercializado em Uberlândia e Patos de Minas, Minas Gerais

Pattern minas cheese is a product developed with pasteurized milk, fermented with mesophilic cultures, and with the final addition of rennet. This cheese undergoes an artisanal maturation process and possesses a firm shell of yellowish color and striking and acidic flavor. Our study objective was to evaluate the microbiological quality of pattern minas cheese. We collected 40 samples from two micro regions (Uberlândia and Patos de Minas) of the Triângulo Mineiro and Alto Paranaíba mesor regions of the State of Minas Gerais, Brazil. The microbiological test results were recorded as counts of enterobacteria, Escherichia coli, coliforms at 35°C, coagulase-positive Staphylococcus and Salmonella spp. In the Patos de Minas micro region, the results were 45%, 35%, 20%, and 20% higher than 103 CFU/g for the counts of enterobacteria, Escherichia coli, coliforms at 35°C, and Staphylococcus coagulase-positive, respectively. Five percent of the analyzed samples were positive for Salmonella spp. in the Uberlândia micro region. Based on the findings of the microbiota in the cheese analyzed from the micro regions (Uberlândia and Patos de Minas), we concluded that the hygiene conditions in the manufacturing, handling, transport, and storage stages were precarious, requiring the implementation of Good Manufacturing Practices (GMP) systems, including Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP).(AU)

O queijo minas padrão é um produto elaborado com leite pasteurizado, fermentado com culturas mesófilas e adição de coalho. Esse queijo passa por um processo de maturação artesanal, possui uma casca firme de cor amarelada e sabor ácido. O presente trabalho avaliou a qualidade microbiológica de queijo minas padrão comercializado em duas microrregiões (Uberlândia e Patos de Minas) da mesorregião do Triângulo Mineiro e Alto Paranaíba do estado de Minas Gerais, Brasil. Foram examinadas 40 amostras de queijo. Os ensaios microbiológicos foram contagens de enterobactérias, Escherichia coli, coliformes a 35 oC, Staphylococcus coagulase positiva e pesquisa de Salmonella spp. Na microrregião de Patos de Minas, os resultados foram de 45%, 35%, 20% e 20% superiores a 103 CFU/g para as contagens de enterobactérias, Escherichia coli, coliformes a 35oC e Staphylococcus coagulase positiva, respectivamente. Cinco por cento das amostras analisadas foram positivas à pesquisa de Salmonella spp. Considerando a microrregião analisada (Uberlândia e Patos de Minas), a conclusão obtida foi que na região estudada, as condições de higiene nas etapas de fabricação, manuseio, transporte e armazenamento do queijo minas padrão são precárias, sendo necessária a implementação de sistemas de Boas Práticas de Fabricação (GMP), incluindo Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (HACCP).(AU)

Methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis in handler of cheese made with goat's milk in Brazil / Staphylococcus epidermidis resistente à meticilina em manipulador de queijo elaborado com leite de cabra no Brasil

ABSTRACT: In the Northeastern Brazil, artisanal cheese production is an important local economic activity for small producers. Methicillin-resistant Staphylococcus is responsible for causing infection in animals and humans. This study described the first detection of methicillin-resistant S. epidermidis isolated in the nasal cavity of a handler of coalho cheese made with goat's milk in Northeastern Brazil. This brief communication highlighted the importance of adopting biosafety measures by cheese handlers, in order to reduce possible contamination and the spread of pathogens in the production chain of this type of artisanal cheese in Brazil.

RESUMO: Na região Nordeste do Brasil, a cadeia de produção de queijo artesanal é uma atividade local importante para pequenos produtores. Staphylococcus resistentes à meticilina são responsáveis por causar infecções em animais e seres humanos. Neste estudo descreve-se a primeira detecção de S. epidermidis resistente à meticilina isolado da cavidade nasal de um manipulador de queijo coalho elaborado com leite de cabra no Nordeste do Brasil. Este relato destaca a importância da adoção de medidas de biossegurança por manipuladores de queijo, a fim de reduzir possíveis contaminações e a disseminação de patógenos na cadeia produtiva deste tipo de queijo artesanal no Brasil.

Caracterização microbiológica do queijo minas artesanal comercializado em São Paulo: segurança, higiene e diversidade microbiana / Microbiological characterization of artisanal minas cheese marketed in São Paulo: safety, hygiene and microbial diversity

Existe no Brasil uma grande variedade de queijos que se enquadram no conceito de "queijo minas artesanal". Produtores consideram que a legislação que regula o setor, em níveis municipal, estadual e federal, é confusa e excessivamente rigorosa, dificulta a padronização dos produtos, interfere no crescimento do setor e facilita a comercialização de queijos em desacordo com os padrões de higiene e segurança estabelecidos. Este trabalho de pesquisa de mestrado pretendeu gerar dados sobre as condições higiênico-sanitárias e segurança microbiológica de queijos minas artesanal, produzidos em Minas Gerais e coletados no comércio da cidade de São Paulo, bem como contribuir com informações a respeito da diversidade bacteriana nos queijos estudados. Foram estudadas 100 amostras de queijo minas artesanal coletadas no comercio de São Paulo, que foram submetidas à enumeração de microrganismos indicadores de higiene (coliformes, Escherichia coli e estafilococos), Salmonella e Listeria monocytogenes, empregando técnicas convencionais de cultivo e também moleculares. Os estafilococos coagulase positivos foram estudados quanto à tolerância à biocidas de interesse para alimentos, determinando-se também a diversidade microbiana, utilizando-se Next Generation Sequencing em Illumina MiSeq. Os resultados indicaram baixa ocorrência dos patógenos estudados, e que 10% e 32% das amostras excederam os limites para Escherichia coli e estafilococos coagulase positiva estabelecidos pelas legislações vigentes, respectivamente. Entre os estafilococos coagulase positiva, 37,7% foram tolerantes a algum dos biocidas testados, com maior prevalencia dos tolerantes ao cloreto de benzalcônio (75%). Quanto à diversidade bacteriana, os gêneros predominantes foram Streptococcus (32,7%), Lactococcus (30,6%) e Corynebacterium (15,6%). A microbiota bacteriana detectada nos queijos Canastra estudados não apresentou dissimilaridade quando comparada à microbiota bacteriana de outros queijos Canastra coletados nos locais de produção em outro estudo. Observou-se que as regiões de coleta dos queijos na cidade de São Paulo e os pontos de comercialização em São Paulo apresentam maior influência sobre a microbiota detectada para o queijo minas artesanal do que as regiões de produção (p<0,05), sugerindo a interferência das práticas de manipulação após a produção na diversidade bacteriana detectada nos queijos

There is a wide variety of cheeses in Brazil that fit the concept of "artisanal minas cheese". Producers consider that the legislation that regulates the sector, at municipal, state and federal levels, is confusing and excessively strict, hinders the standardization of products, interferes with the growth of the sector and facilitates the marketing of cheeses in disagreement with the hygiene and safety standards. This master's research work aimed to generate data on the hygienic-sanitary conditions and microbiological safety of artisanal Minas cheeses, produced in Minas Gerais and collected in São Paulo's commerce, as well as to contribute with information about the bacterial diversity in the studied cheeses. One hundred samples of artisanal Minas cheese collected in the São Paulo market were subjected to the enumeration of hygiene indicator microorganisms (coliforms, Escherichia coli and staphylococci), Salmonella and Listeria monocytogenes, using conventional cultivation and also molecular techniques. Coagulase positive staphylococci were studied for tolerance to biocides of interest to food, and microbial diversity was also determined using Next Generation Sequencing in Illumina MiSeq. The results indicated a low occurrence of the studied pathogens, and that 10% and 32% of the samples exceeded the limits for Escherichia coli and coagulase positive staphylococci established by the current legislation, respectively. Among the coagulase positive staphylococci, 37.7% were tolerant to at least one of the tested biocides, with a greater prevalence of those tolerant to benzalkonium chloride (75%). As for microbial diversity, the predominant genera were Streptococcus (32.7%), Lactococcus (30.6%) and Corynebacterium (15.6%). The bacterial microbiota detected in the studied Canastra cheeses showed no dissimilarity when compared to the bacterial microbiota of other Canastra cheeses collected at the production sites in another study. It was observed that the cheese collection regions in the city of São Paulo and the marketing points in São Paulo had a greater influence on the detected bacterial microbiota than the production regions (p<0.05), suggesting the interference of the practices of manipulation after production in the bacterial diversity detected in the cheeses

Development of stuffed coalho cheese in the traditional, lactose-free and probiotic-added formulations / Desenvolvimento de queijo de coalho trufado nas versões tradicional, delactosado e com adição de probiótico

ABSTRACT: The probiotic products from the dairy market have been extensively exploited as well as lactose-free derivatives, suitable for lactose intolerant individuals. This research aimed to manufacture stuffed cheese with Brazilian cream cheese and spices in three versions (traditional, lactose-free, and probiotic cheese) and evaluate their quality by physico-chemical and microbiological analyses, Lactic Acid Bacteria (LAB) viability, and acceptance and preference assays. Physico-chemical properties of the formulations were all in accordance with the standards for the fat content of the Ordinance No. 146 for the traditional (54.06%) and probiotic (45.45%) full-fat samples and free-lactose (39.28%) medium-fat sample. Regarding the microbiological safety, all the samples presented to be ready for consumption, and the LAB count were still viable after 42 days of storage in the probiotic formulation at the order of 108 log CFU/mL. The lactose-free formulation achieved the highest acceptance rates among the public regarding sensorial qualities with an average grade of 7.27 out of 9. In the end, the three types of stuffed coalho cheese were successful in total quality control and also the probiotic formulation with the desired viable count after storage and lactose-free formulation with the best acceptance rates by the public.

RESUMO: A crescente consciência dos consumidores sobre a relação existente entre saúde e dieta, tem despertado o interesse por alimentos que promovem efeitos benéficos ao ser humano. Desta maneira, o mercado de produtos lácteos com alegações probióticas passou a ser bastante explorado, assim como os delactosados, adequados ao público intolerante a lactose. O objetivo deste estudo foi produzir queijo de coalho trufado com requeijão e especiarias nas versões tradicional, delactosado e com adição de probiótico, sendo realizadas análises físico-química, microbiológicas, viabilidade das bactérias ácido láticas, teste de aceitação e preferência. As características físico-químicas dos queijos produzidos permaneceram dentro dos padrões da legislação brasileira. Os queijos desenvolvidos apresentaram segurança microbiológica para consumo e as bactérias ácido láticas revelaram-se viáveis no produto por um período de 42 dias. Considerado mais uma alternativa para o público com intolerância a lactose, o queijo coalho trufado delactosado demonstrou melhor aceitação sensorial em relação as demais versões.

Resistome in gram-negative bacteria from soft cheese in Brazil / Resistoma em bactérias gram-negativas de queijo minas frescal no Brazil

Objective: evaluation of antibiotic resistance in Gram-negative microbiota from ready-to-eat cheese samples. Methodology: this research applied an adapted methodology to select from a food sample viable Gram-negative microbiota displaying antibiotic resistance. The selected food was a cheese that is commonly consumed without thermal processing, the Minas Frescal cheese. The evaluation was followed by a PCR screening in this resistant microbiota, for genes that provide resistance to antibiotics and also to the quaternary ammonium. Results: all cheese samples harbored a resistant microbiota. In 13.3% of the cheese samples analyzed, the resistance reached all ten different antibiotics tested and, in 80%, 8 to 10 different antibiotics. In antibiotics considered critics as the carbapenems: ertapenem presented resistant microbiota in 86.7% of the samples. In cephalosporins, the resistance reached 100% in the third generation (ceftazidime) and almost half of the samples (46.7%) in the fourth generation (cefepime). In genotypic research, seven different resistance genes were found in 69.2% of the bacterial pools, including the beta-lactamase-producing genes ctx, tem, shv, tetracycline-resistant genes, and a high rate of integrons class 1 and 2. Conclusion: the results indicate phenotypically and genotypically that the Minas Frescal cheese can harbor potential resistant microbiota. Therefore, the methodology used is a viable possibility and with a broader answer about the food microbiota role in resistance. This research corroborates the food area as an important sector to be managed to reduce the process of antibiotic resistance.

Objetivo: avaliação da resistência a antibióticos em microbiota Gram-negativa de amostras de queijo prontas para consumo. Metodologia: esta pesquisa aplicou uma metodologia adaptada para selecionar a microbiota Gram-negativa viável apresentando resistência a antibióticos em uma amostra de alimento. O alimento selecionado foi um queijo frequentemente consumido sem processamento térmico, o queijo Minas Frescal. A avaliação foi seguida de uma triagem por PCR, nesta microbiota resistente, para genes que fornecem resistência aos antibióticos e também ao quaternário de amônio. Resultados: todas as amostras de queijo apresentaram microbiota resistente. Em 13,3% dos queijos analisados essa resistência alcançou todos os 10 diferentes antibióticos testados e em 80% entre 8 e 10 antibióticos diferentes. Em antibióticos considerados críticos como os carbapenêmicos: ertapenem apresentou microbiota resistente em 86,7% das amostras. Nas cefalosporinas, a resistência atingiu 100% na terceira geração (ceftazidima) e quase a metade das amostras (46,7%) na quarta geração (cefepime). Na pesquisa genotípica, sete diferentes genes de resistência foram encontrados em 69,2% dos pools bacterianos, incluindo o genes produtores de beta-lactamase, genes de resistência à tetraciclina, ctx, tem, shv e uma alta taxa de integron classe 1 e 2. Conclusão: os resultados indicam fenotipicamente e genotipicamente que o queijo Minas Frescal pode apresentar uma potencial microbiota resistente. Portanto, a metodologia utilizada é uma possibilidade viável e com uma resposta mais ampla sobre o papel da microbiota na resistência. Esta pesquisa corrobora a área de alimentos como um setor importante a ser gerenciado para redução no processo de resistência a antibióticos.

Sensory acceptance and physico-chemical composition of mixed minas frescal cheese / Aceitação sensorial e composição físico-química de queijo minas frescal misto

Buffalo milk presents higher proteins and lipids concentration than cow milk, which provides a better yield in cheese-making production and products with considerable sensory approval. However, buffalo milk is not regularly available throughout the year due to different handling conditions. Thus, to guarantee the supply of buffalo milk dairy products during the year, the addition of bovine milk is an alternative. Therefore, this study aimed to test the effect of a buffalo and bovine milk mixture for the Minas Frescal cheese elaboration by physico-chemical, sensory analysis and obtaining yield. The raw material was analysed for the parameters of acidity, density, fat, total solids and solid-not-fat. There were 3 Minas Frescal cheeses elaborated from 3 formulations: 100% buffalo milk, 100% bovine milk and the mixture of 50% of each milk. The cheeses were submitted to the Gravimetric and Gerber methods to obtain values of moisture and fat, as well as to obtain, indirectly, fat in dry matter. For bovine and buffalo milk, the parameters evaluated (acidity, density, fat, total solids and solids-not-fat) complied with Brazilian legislation and parameters described in the literature. For the bovine, mixed and buffalo fresh cheeses, values were obtained, respectively, for moisture (74.04, 60.93 and 63.61), fat in dry matter (44.35, 42.23 and 46.03) and cheese yield (27, 20.8 and 24.2), indicating a higher yield for the bovine Minas Frescal cheese and higher fat content for the buffalo cheese. The overall acceptance of the mixed Minas Frescal cheese was significantly superior to the bovine and buffalo cheese. The parameters of colour, appearance, texture, flavour and overall acceptance were above 8 points in the hedonic scale ('moderately liked' to 'extremely liked'), and the aroma attribute scored was above 7 ('I enjoyed regularly' to 'moderately liked'). Therefore, the elaboration of Minas Frescal cheese from the mixture of 2 matrices (buffalo and bovine milk) demonstrated technological viability with the potential to meet the demands of the consumer market.

O leite de búfala possui maior porcentagem de todos os componentes tornando-o uma matéria-prima adequada com potencial para fornecer um maior rendimento e qualidade nutricional na produção de queijo. No entanto, o leite de búfalo não está disponível regularmente ao longo do ano devido a diferentes condições de manejo. Assim, para garantir a oferta de produtos lácteos com leite de búfala independentemente da época, a adição de leite bovino pode ser vista como uma alternativa. Logo, este trabalho teve como objetivo testar o efeito da mistura do leite de búfalo e bovino na elaboração do queijo Minas Frescal por meio de análises físico-químicas e sensoriais e obtenção do rendimento economico. A matéria-prima foi analisada quanto aos parâmetros: acidez titulável, densidade, gordura, sólidos totais e sólidos totais desengordurados. Três variedades de queijo Minas Frescal foram elaboradas a partir de três formulações: 100% de leite de búfala, 100% de leite bovino e da mistura de 50% de cada leite. Os queijos foram submetidos aos métodos Gavimetric e Gerber para obtenção de umidade e gordura, bem como, indiretamente, para obtenção de matéria gorda no extrato seco. Para o leite bovino e de búfala, os parâmetros avaliados (acidez titulável, densidade, gordura, sólidos totais e sólidos totais desengordurados) estavam de acordo com a legislação brasileira e parâmetros descritos na literatura. Para os queijos bovino, misto e de búfala, foram obtidos, respectivamente, para: umidade (74,04; 60,93 e 63,61), gordura na matéria seca (44,35; 42,23 e 46,03) e rendimento econômico (27, 20,8 e 24,2) indicando maior rendimento o queijo Minas Frescal bovino e maior teor de gordura para o queijo búfalo. A aceitação global do queijo Minas Frescal misto foi significativamente superior ao do queijo bovino e bubalino. Os parâmetros de cor, aparência, textura, sabor e aceitabilidade global foram acima de 8 pontos (entre "gostei moderadamente" e "extremamente gostei") e o atributo aroma obteve pontuação acima de 7 ("gostei regularmente" para "gostei moderadamente"). Portanto, a elaboração do queijo Minas Frescal da mistura de leite bovino ao búfalo demonstrou potencial para atender as demandas do mercado consumidor.

Physical-chemical characterization of fresh shanklish cheese with kefir and turmeric extract (Curcuma longa l. ) / Caracterização físico-química de queijo chancliche fresco adicionado de kefir e extrato de açafrão (Curcuma longa l. ) / Caracterización física y química del queso chancliche fresco añadido con extracto de kefir y azafrán (Curcuma longa l. )

Currently, a large number of consumers seek to include functional foods in their diets, aiming beyond the nutritional value prevent health problems, among these foods are probiotic products and vegetables containing bioactive compounds. The objective of this work was to develop and physical-chemically evaluate fresh Shanklish cheeses with the addition of kefir and turmeric extract in order to develop a functional cheese. Shanklish cheese was manufactured and submitted to three different treatments: with the addition of kefir, turmeric extract and both of them. The results obtained for cheese composition were close to the results found in the literature and the cheeses showed stable pH values during the 21 days of storage at 8ºC. It concluded that the addition of kefir and turmeric extract in Shanklish cheese is a way to develop a functional cheese.(AU)

Atualmente é grande o número de consumidores que buscam incluir alimentos funcionais em suas dietas visando além do valor nutricional a prevenção de problemas de saúde, entre esses alimentos encontram-se os produtos probióticos e os vegetais contendo compostos bioativos. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e avaliar físico-quimicamente queijos Chancliche frescos com adição de kefir e extrato de cúrcuma buscando o desenvolvimento de um queijo funcional. Foram fabricados queijos Chancliche e submetidos a três tratamentos diferentes: com adição de kefir, extrato de cúrcuma e ambos. Os resultados obtidos para a composição dos queijos estavam próximos dos resultados encontrados na literatura e os queijos mostraram pH estável durante os 21 dias de armazenamento a 8ºC. Concluiu-se que a adição de kefir e extrato de cúrcuma em queijo Chancliche é uma maneira de desenvolver um queijo funcional.(AU)

Actualmente, una gran cantidad de consumidores buscan incluir alimentos funcionales en sus dietas, apuntando más allá del valor nutricional para prevenir problemas de salud, entre estos alimentos se encuentran los productos probióticos y los vegetales que contienen compuestos bioactivos. El objetivo de este trabajo fue desarrollar y evaluar químicamente quesos Chancliche frescos con la adición de kéfir y extracto de cúrcuma para desarrollar un queso funcional. Los quesos Chancliche fueron elaborados y sometidos a tres tratamientos diferentes: con la adición de kéfir, extracto de cúrcuma y ambos. Los resultados obtenidos para la composición de los quesos estaban cercanos a los resultados encontrados en la literatura y los quesos mostraron pH estable durante los 21 días de almacenamiento a 8ºC. Se concluyó que la adición de kéfir y extracto de cúrcuma en queso Chancliche es una forma de desarrollar un queso funcional.(AU)

Detecção de listeria monocytogenes em produtos lácteos e produtos cárneos à base de frango / Detection of listeria monocytogenes in dairy products and chicken meat / Detección de listeria monocytogenes en productos lácteos y en productos cárnicos a base de pollo

Listeria monocytogenes é um patógeno de origem alimentar que frequentemente causa infecções, podendo até ser fatal. Trata-se de um microrganismo ubiquitário, transmitido ao ser humano principalmente por meio dos alimentos, como os produtos prontos para o consumo. O objetivo deste estudo foi verificar os índices de positividade para L. monocytogenes em queijos e produtos cárneos à base de frango, analisados em um laboratório de microbiologia de alimentos do Rio Grande do Sul. A triagem inicial das amostras seguiu o protocolo AOAC, método n° 2004.02, 2004. A confirmação dos resultados positivos foi realizada conforme Instrução Normativa nº 62/2003 (Mapa) e ISO 11290-1:1996, Amd.1:2004. Foram analisadas 666 amostras de queijos de baixa umidade, 3.897 de média umidade e 826 de alta umidade. Dos produtos à base de frango foram analisadas 547 amostras de salsicha, 172 de mortadela e 24 de linguiça. O estudo verificou que os queijos de baixa umidade estão significativamente associados ao resultado positivo (p=0,002) para L. monocytogenes e os queijos de alta umidade associaram-se ao resultado negativo (p=0,002). Com relação aos produtos à base de frango, a salsicha esteve significativamente associada ao resultado negativo para L. monocytogenes (p≤0,01), e a mortadela significativamente associada ao resultado positivo (p≤0,01). Visto que de modo geral esses produtos são consumidos diretamente, sem o emprego de calor, sugere-se reforçar tanto o controle sobre as boas práticas de fabricação quanto o monitoramento dos produtos.

Listeria monocytogenes is a foodborne pathogen that often causes infections and may even be fatal. It is an ubiquitous microorganism, transmitted to humans mainly through food such as ready-to-eat products. This study sought to verify the positivity indexes for L. monocytogenes in cheese and chicken meat products, analyzed in a food microbiology laboratory in Rio Grande do Sul, Brazil. The initial sample screening followed the AOAC protocol, Method No. 2004.02, 2004. Confirmation of positive results was performed according to Normative Instruction 62/2003 (MAPA) and ISO 11290-1: 1996, Amd.1: 2004. A total of 666 low moisture, 3897 medium moisture and 826 high moisture cheese samples were analyzed. Of the chicken meat products, 547 wiener, 172 mortadella and 24 sausage samples were analyzed. Results showed that low moisture cheeses were significantly associated with a positive result (p=0.002) for L. monocytogenes, while high moisture cheeses were associated with a negative result (p= 0.002). As for chicken meat products, the wiener was significantly associated with the negative result for L. monocytogenes (p≤0.01) and the mortadella significantly associated with the positive result (p≤0.01). Since most of these products are consumed directly, without the use of heat, it is suggested to reinforce both the control over Good Manufacturing Practices and the monitoring of the products.

Listeria monocytogenes es un patógeno de origen alimentario causante muchas veces de infecciones, incluso fatales. Es un microorganismo ubiquitario, que se transmite al hombre principalmente a través de los alimentos, generalmente por productos listos para el consumo. El objetivo de este estudio fue verificar los índices de positividad para L. monocytogenes en quesos y productos cárnicos a base de pollo, analizados en un laboratorio de microbiología de alimentos de Rio Grande do Sul (Brasil). El tamizaje inicial de las muestras siguió el protocolo AOAC, método 2004.02, 2004. La confirmación de los resultados positivos fue realizada conforme a la Instrucción Normativa 62/2003 (Mapa) e ISO 11290-1:1996, Amd.1:2004. Se analizaron 666 muestras de quesos de baja humedad, 3.897 de media humedad y 826 de alta humedad. De los productos a base de pollo se analizaron 547 muestras de salchichas, 172 de mortadela y 24 de chorizos. Este estudio verificó que los quesos de baja humedad fueron significativamente asociados al resultado positivo (p=0,002) para L. monocytogenes, y los quesos de alta humedad al resultado negativo (p=0,002). En cuanto a los productos a base de pollo, las salchichas estuvieron significativamente asociadas al resultado negativo para L. monocytogenes (p≤0,01), y la mortadela fue significativamente asociada al resultado positivo (p≤0,01). Dado que la mayoría de estos productos son consumidos directamente, sin cocción, se sugiere un mayor control de las buenas prácticas de fabricación y de monitoreo de los mismos.

Atividade antagonista in vitro de bactérias ácido láticas isoladas de queijo de coalho artesanal do Sertão paraibano frente a microrganismos indicadores / Antagonist activity in vitro of lactic acid bacteria isolated from coalho cheese from Sertão paraibano front microorganisms indicators

Bactérias ácido láticas (BAL) produzem substâncias inibitórias de patógenos e deteriorantes de alimentos e isso tem despertado interesse sobre seu uso na preservação e na segurança sanitária desses produtos. Assim, o estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a atividade inibitória de Streptococcus infantarius subsp. infantarius isoladas de queijo de coalho artesanal do Sertão da Paraíba frente a microrganismos indicadores. A avaliação do potencial antagônico foi realizada pela técnica de difusão em disco frente à estirpe reveladora Escherichia coli, isolada das mesmas amostras de queijos e frente ao patógeno de referência Escherichia coli ATCC 3539. Das 11 estirpes analisadas, 81,8% foram capazes de inibir o microrganismo indicador isolado dos mesmos queijos de coalho, enquanto 36,4% das bactérias láticas apresentaram inibição frente ao patógeno de referência. Conclui-se que as cepas Streptococcus infantarius subsp. infantarius isoladas de queijos de coalho do Sertão da Paraíba apresentam potencial antagônico e podem assegurar a qualidade microbiológica de alimentos fermentados, inclusive o queijo de coalho.(AU)

Lactic acid bacteria (BAL) produce pathogen inhibiting and food damaging substances and this has raised interest in their use in the preservation and health safety of these products. Thus, the study was carried out with the objective of evaluating the inhibitory activity of Streptococcus infantarius subsp. infantarius isolated from artisanal coalho cheese from Sertão da Paraíba against indicator microorganisms. The evaluation of the antagonistic potential was performed using the disk diffusion technique against the Escherichia coli revealing strain, isolated from the same cheese samples and against the reference pathogen Escherichia coli ATCC 3539. Of the 11 strains analyzed, 81.8% were able to inhibit the indicator microorganism isolated from the same coalho cheeses, while 36.4% of the lactic acid bacteria showed inhibition compared to the reference pathogen. It is concluded that the strains Streptococcus infantarius subsp. infantarius isolated from coalho cheeses from Sertão da Paraíba have antagonistic potential and can ensure the microbiological quality of fermented foods, including coalho cheese.(AU)

Avaliação da contaminação por Staphylococcus aureus em queijo coalho artesanal elaborado com leite de cabra produzido no estado de Pernambuco / Evaluation of contamination by Staphylococcus aureus in artisanal curd cheese made from goat's milk produced in the state of Pernambuco

A fabricação de queijo coalho artesanal elaborado com leite de cabra é composta pelas etapas de obtenção do leite, refrigeração, manipulação e armazenamento, que aumentam o risco de contaminação do produto. Objetivou-se neste estudo avaliar o nível de contaminação por Staphylococcus aureus em amostras de queijo coalho artesanal produzido com leite de cabra cru no estado de Pernambuco, Brasil, bem como avaliar a concordância entre a técnica oficial da Instrução Normativa nº62/2003 (Mapa) e a técnica molecular (gene nuc) para identificar S. aureus no queijo. Houve crescimento de colônias típicas de Staphylococcus aureus em 100% das amostras, e a contagem variou de 7,0×103 a 8,6×106 UFC/g. Das 30 amostras analisadas, 18 (60,0%) apresentaram valores superiores ou iguais a 105UFC/g, e 21 (70,0%) estavam contaminadas por S. aureus. A concordância entre os métodos de diagnóstico de S. aureus em queijo coalho caprino foi moderada. O nível de contaminação dos queijos revela a necessidade de ações de melhoria das condições de elaboração do produto, a fim de garantir um produto seguro aos consumidores.(AU)

The manufacture of artisanal Coalho cheese made from goat's milk is composed of the steps of obtaining milk, refrigeration, handling and storage that increase the risk of product contamination. The objective of this study was to evaluate the level of contamination by Staphylococcus aureus in samples of artisanal Coalho cheese produced with raw goat's milk in the state of Pernambuco, Brazil. In addition to evaluating the agreement between the official technique of Normative Instruction nº62/2003 (MAPA) and the molecular technique (nuc gene) to identify S. aureus in cheese. There was growth of typical Staphylococcus aureus colonies in 100% of the samples and the count ranged from 7.0×103 to 8.6×106 CFU/g. Of the 30 analyzed samples, 18 (60.0%) presented values greater than or equal to 105CFU/g and 21 (70.0%) were contaminated by S. aureus. The agreement between the diagnostic methods of S. aureus in goat cheese was moderate. The level of contamination of cheeses reveals the need for actions to improve the preparation conditions of the product in order to guarantee a safe product to consumers.(AU)

Assessment of physicochemical, textural and microbiological properties of brazilian white mold surface-ripened cheeses: a technological approach / Avaliação das propriedades físico-químicas, de textura e microbiológicas de queijos brasileiros maturados com mofo branco: uma abordagem tecnológica

ABSTRACT: There are no specific technical regulations regarding the identity and quality of white mold surface-ripened cheeses in Brazil. These cheeses are sold both whole (Camembert-type) and in wedges (Brie-type). The aim of the study was to evaluate the physical and chemical properties; technological parameters and microbiological safety of 20 whole cheeses (Camembert-type) and 16 cheese wedges (Brie-type) produced in Brazil. Samples showed a wide range in sodium (91.0-731.0 mg/100 g, cheeses wedges) and calcium (238.0-1100.0 mg/100g, whole cheeses) contents. The cheese groups presented no significant differences in relation to the majority of the analyzed parameters. Listeria monocytogenes was reported in 5% of the whole cheese samples. The other microbiological parameters were in accordance with the current legislation, RDC no 12/2001 of Anvisa. The comparative assessments between these two cheeses indicated that they are different. In addition, the wide range of results indicated a lack of processing standardization. The mean values of the physicochemical and textural parameters should be considered as recommended for these cheeses in Brazil.

RESUMO: No Brasil, não há uma regulamentação técnica específica sobre a identidade e qualidade de queijos maturados com mofo branco na superfície. Estes queijos são comercializados inteiros (tipo Camembert) e em cunhas (tipo Brie). O objetivo da pesquisa foi avaliar as propriedades físicas e químicas; parâmetros tecnológicos e marcadores microbiológicos de 20 queijos inteiros (tipo Camembert) e 16 cunhas de queijo (tipo Brie) produzidos no Brasil. Os teores de sódio e cálcio apresentaram elevada amplitude (8,0 e 4,6 vezes o valor mínimo, respectivamente). Os valores médios destes queijos não apresentaram diferenças significativas em relação à maioria dos parâmetros analisados. Listeria monocytogenes foi encontrada em 5% das amostras de queijo tipo Camembert. Os demais parâmetros microbiológicos estavam de acordo com a legislação vigente, RDC no 12/2001 da Anvisa. Esta avaliação comparativa entre estes dois queijos indica que são diferentes. Além disso, os valores com elevada amplitude correspondem a falta de padronização do processamento. Os valores médios poderiam ser considerados como recomendados para estes queijos no Brasil.

Milk fraud by the addition of whey using an artificial neural network / Identificação de fraude de leite por adição de soro de leite usando redes neurais artificiais

ABSTRACT: The adulteration of milk by the addition of whey is a problem that concerns national and international authorities. The objective of this research was to quantify the whey content in adulterated milk samples using artificial neural networks, employing routine analyses of dairy milk samples. The analyses were performed with different concentrations of whey (0, 5, 10, and 20%), and samples were analyzed for fat, non-fat solids, density, protein, lactose, minerals, and freezing point, totaling 164 assays, of which 60% were used for network training, 20% for network validation, and 20% for neural network testing. The Garson method was used to determine the importance of the variables. The neural network technique for the determination of milk fraud by the addition of whey proved to be efficient. Among the variables of highest relevance were fat content and density.

RESUMO: A adulteração do leite pela adição de soro de leite é um problema que diz respeito às autoridades nacionais e internacionais. O objetivo deste trabalho foi quantificar o teor de soro em amostras de leite adulterado por meio de redes neurais artificiais, usando como variáveis de entrada os resultados de análises rotineiras em amostras de leite. As análises foram realizadas com diferentes concentrações em relação à adição de soro de leite (0, 5, 10 e 20%), e as amostras foram analisadas quanto à gordura, sólidos não gordurosos, densidade, proteína, lactose, minerais e ponto de congelamento, totalizando 164 ensaios, dos quais 60% foram utilizados para treinamento em rede, 20% para validação de rede e 20% para teste de rede neural. O método de Garson foi utilizado para determinar a importância das variáveis. A técnica de redes neurais para a determinação da fraude ao leite por adição de soro provou ser eficiente. Entre as variáveis de maior relevância estavam o teor de gordura e a densidade.

Listeria spp. em queijos Minas Frescal e avaliação das condições higiênicossanitárias de produção e comercialização em Viçosa, MG, Brasil / Listeria spp. in Minas Frescal cheeses and assessement of hygienic-sanitary conditions of production and commercialization in Viçosa, MG, Brazil

A produção de queijo Minas Frescal em propriedades rurais é uma atividade econômica importante em Minas Gerais. Entretanto, a presença de micro-organismos patogênicos compromete a segurança desses produtos, coloca a saúde pública em risco e ameaça esta atividade. Neste estudo, objetivou-se avaliar a ocorrência de Listeria spp. em queijos Minas Frescal, as condições de produção e comercialização desses produtos e relacioná-las à presença desses micro-organismos. Foram coletadas 161 amostras, 81 em agroindústrias e 80 em seus pontos de venda. Foram utilizados métodos analíticos oficiais estabelecidos pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento para detecção e diferenciação das espécies de Listeria. A adoção das boas práticas durante a fabricação e a comercialização foi mensurada mediante avaliação in loco direcionada por listas de verificação pré-elaboradas. Constatou-se Listeria spp. em 14 amostras (8,7%) provenientes de oito das doze agroindústrias estudadas, quatro inspecionadas e quatro não inspecionadas. L. monocytogenes foi isolada em duas amostras. O percentual de atendimento às boas práticas de fabricação variou entre 28,3% e 51,1% e diversas irregularidades foram observadas durante a comercialização dos queijos. Os resultados indicam risco potencial do consumo deste tipo de produto e a necessidade de adoção das boas práticas de fabricação e comercialização para prevenir contaminações. (AU)

The production of Minas Frescal cheese on rural properties is an important economic activity in Minas Gerais, Brazil. However, the presence of pathogenic microorganisms compromises the safety of these products, puts public health at risk and threatens this activity. The purpose of this paper was to evaluate the conditions of production and commercialization of the Minas Frescal cheese produced in family agroindustries of Viçosa, MG and to connect them to presence of Listeria spp. A total of 161 samples of Minas Frescal cheese were collected, 81 which were in agroindustries and 80 in their respective market. Were adopted official analytical methods established by the Agriculture Ministry for the detection and differentiation of Listeria spp. The conditions of manufacture and commercialization were evaluated through observations directed by pre-elaborated checklists. Listeria spp. was detected in 4 samples (8.7%) from eight different establishment, four inspected and four non-inspected. L. monocytogenes was isolated in two samples. The compliance with good manufacturing practices ranged from 28.3% to 51.1% and several irregularities were observed during the marketing of the cheeses. These results indicate the potential risk of consumption of this product and the need to prevent contamination of this product in manufacturing and marketing stages. (AU)